Especies de Clostridium

Código de prueba: DIAG0037

Detección cualitativa de la bacteria Clostridium difficile por reacción en cadena de la polimerasa. El ensayo también detecta y diferencia los genes A y B productores de toxina de C. dif.

Código de prueba: DIAG0042 Detección cualitativa ultrasensible de la toxina alfa y enterotoxina de Clostridium perfringens en tiempo rea lPCR

Código de prueba: DIAG0043 Detección cualitativa ultrasensible de la bacteria Clostridium piliforme (enfermedad de Tyzzer) mediante PCR en tiempo real

Código de prueba: DIAG0061 – Detección cualitativa pero no diferenciación de varias especies comunes de Clostridium, incluidas C. difficile, C. piliforme y C. perfringens, mediante reacción en cadena de la polimerasa. El ensayo NO detecta Clostridium botulinum .

Clostridium difficile es una bacteria bastón móvil gram-positiva, anaeróbica, formadora de esporas que habitualmente habita en el tracto intestinal de muchas especies de mamíferos, reptiles y aves. También se encuentra en el medio ambiente. La bacteria es un organismo muy diverso, con más de 400 tipos únicos y tiene varios factores de virulencia. Las exotoxinas A y B son los factores más importantes, y la producción bacteriana de exotoxinas se correlaciona con la patogenicidad de cepas individuales de C. difficile. . La toxina A es una enterotoxina que promueve la exudación de líquido de la mucosa intestinal y actúa de forma sinérgica con la toxina citotóxica B mediante la unión a receptores específicos en la superficie de los enterocitos. La acción combinada de estas toxinas da como resultado la necrosis del epitelio superficial y el edema en las áreas afectadas del intestino.

El organismo es una causa importante de enfermedad entérica en roedores y caballos de laboratorio. Los hámsteres, cobayas y ratones pueden verse afectados por la colitis pseudomembranosa inducida por la terapia antimicrobiana. En potros recién nacidos, C. difficile se ha asociado con enterocolitis necrotizante hemorrágica y diarrea. La falta de una microflora intestinal establecida puede hacer que los potros sean más susceptibles a la colonización por esta bacteria. Los caballos adultos pueden desarrollar tiflocolitis y se han informado brotes de diarrea adquirida nosocomialmente (Donaldson y Palmer, 1999; Madewell et al., 1995; Perrin et al., 1993).

C. difficile también se ha implicado recientemente como causa de tiflocolitis en lechones lactantes, diarrea crónica en perros y enterotoxemia en avestruces.

En pacientes clínicamente normales, se cree que una microflora intestinal establecida previene competitivamente la proliferación de C. difficile y la subsecuente unión de la toxina. La alteración del equilibrio microbiano intestinal con el uso de antibióticos y una mayor exposición al organismo en un entorno hospitalario permite que C. difficile colonice el intestino en individuos susceptibles.

El cultivo bacteriano de C. difficile no es muy sensible y no diferencia las cepas patógenas y no patógenas. Las pruebas específicas para las toxinas de C. difficile utilizadas en el laboratorio de diagnóstico incluyen el cultivo celular, que se basa en la presencia de una toxina biológicamente activa, y un ensayo ELISA que detecta una toxina inmunológicamente activa que puede ser o no biológicamente activa.

La detección por PCR de C. difficile es muy sensible y puede discriminar entre cepas toxigénicas y no toxigénicas del organismo al detectar sus genes productores de toxinas.

Clostridium perfringens es una bacteria anaeróbica, formadora de esporas, grampositiva, con forma de bastoncillo, que se encuentra como un componente normal de la vegetación en descomposición, los sedimentos marinos, el tracto intestinal de los humanos y otros vertebrados, insectos y suelo.

Las infecciones por C. perfringens pueden provocar necrosis tisular, bacteriemia, colecistitis enfisematosa y gangrena gaseosa. Las bacterias pueden secretar α-toxina que da como resultado la formación de gangrena. Si los pacientes ingieren la bacteria, pueden producirse cólicos, diarrea y, a veces, náuseas.

La intoxicación alimentaria debida a la bacteria C. perfringens es una de las causas más comunes de enfermedades transmitidas por los alimentos. Las carnes y aves de corral mal preparadas son comúnmente las fuentes de intoxicación alimentaria. La enterotoxina (CPE) secretada por la bacteria, que media la intoxicación alimentaria, es resistente al calor y no se puede destruir fácilmente. Además, las propias bacterias forman esporas que pueden soportar las temperaturas de cocción. Si estas esporas se dejan a temperatura ambiente, puede comenzar la germinación y desarrollarse colonias bacterianas infecciosas. Generalmente, el tiempo de incubación de estas esporas es de 6 a 24 (comúnmente de 10 a 12) horas después de la ingestión de alimentos contaminados. Dado que la carne y las aves de corral a menudo se preparan antes del consumo, esto brinda buenas oportunidades para que las esporas germinen.

Las personas que ingieren estas bacterias pueden desarrollar calambres abdominales y diarrea. Los vómitos y la fiebre son inusuales. La enfermedad generalmente se resuelve en 24 horas. También es posible que muchos casos de intoxicación alimentaria por C. perfringens sigan siendo subclínicos, ya que los anticuerpos contra la toxina son comunes entre los seres humanos. Esto ha llevado a la conclusión de que la mayoría de la población ha sufrido intoxicación alimentaria por C. perfringens.

La detección de C. perfringens por cultivo es lenta y poco sensible. La detección por PCR es el método de elección para la detección rápida, sensible y específica de este patógeno (Abubakar, 2007).

La infección por Clostridium piliforme da como resultado la enfermedad de Tyzzer, que se caracteriza por lesiones necróticas en el hígado, los órganos digestivos y el corazón. Varias especies animales son susceptibles a este organismo, incluidos ratones, ratas, conejos, perros, gatos, primates y caballos.

El organismo es una bacteria gramnegativa obligada que se encuentra en focos necróticos en forma de esporas. La transmisión se realiza principalmente por vía fecal-oral.

Aunque la enfermedad de Tyzzer es una enfermedad grave en muchas especies animales, los ratones infectados a menudo no presentan síntomas clínicos. Estos ratones se convierten en portadores de la enfermedad y transmiten el patógeno a otros ratones y otras especies animales. Curiosamente, las diferentes cepas de ratones difieren en su susceptibilidad al patógeno (Waggie et al., 1981).

Clostridium piliforme no se puede cultivar en medios artificiales, por lo que el diagnóstico puede basarse en el examen microscópico de tejidos, ensayos serológicos o pruebas de provocación con esteroides; todos estos métodos requieren muestras de sangre o de necropsia. Cuando se realizan ensayos de provocación con esteroides, se debe tener mucho cuidado para evitar la propagación del patógeno. Además, el examen microscópico, la serología y la provocación con esteroides adolecen de una falta de sensibilidad y son laboriosos.

La detección de este patógeno por reacción en cadena de la polimerasa es muy sensible y específica. La prueba se puede realizar en muestras fecales en lugar de sangre o tejido, lo que resulta en menos trauma y riesgo para los animales.

Utilidades:

• Ayudar a confirmar el agente causante de la enfermedad.
• Acorte el tiempo necesario para confirmar un diagnóstico clínico de infección por Clostridium.
• Identificar la infección por Clostridium a nivel de especie.
• Ayuda a garantizar que los animales, las instalaciones y las poblaciones estén libres de estas bacterias.
• Prevención temprana de la propagación de estas bacterias.
• Minimice la exposición del personal a estas bacterias.
• Seguimiento de la seguridad de productos biológicos y vacunas que se derivan de animales susceptibles.

Referencias: Abubakar, I., Irvine, L., Aldus, CF, Wyatt, GM, Fordham, R., Schelenz, S., Shepstone, L., Howe, A., Peck, M. y Hunter, PR (2007 ) Una revisión sistemática de la clínica, la salud pública y la rentabilidad de las pruebas de diagnóstico rápido para la detección e identificación de patógenos intestinales bacterianos en las heces y los alimentos. Salud. Technol. Evaluar. 11: 1-216. Donaldson, MT y Palmer, JE (1999) Prevalencia de enterotoxina de Clostridium perfringens y toxina A de Clostridium difficile en heces de caballos con diarrea y cólicos. Mermelada. Veterinario. Medicina. Assoc. 215: 358 361.

Madewell, BR, Tang, YJ, Jang, S., Madigan, JE, Hirsh, DC, Gumerlock, PH y Silva, J. (1995) Brotes aparentes de diarrea asociada a Clostridium difficile en caballos en un hospital médico veterinario. J. Vet. Diagn. Invertir. 7: 343 346.

Perrin, J., Cosmetatos, I., Gallusser, A., Lobsiger, L., Straub, R. y Nicolet J. (1993) Clostridium difficile asociado con tiflocolitis en un caballo adulto. J. Vet. Diagn. Invertir. 5:99 101.

Waggie, KS, Hansen, CT Ganaway, JR y Spencer, TS (1981) Un estudio de la susceptibilidad de cepas de ratón a Bacillus piliformis (enfermedad de Tyzzer): la asociación de la función de las células B y la resistencia. Laboratorio. Anim. Sci. 31: 139-142

Requisitos de la muestra: hisopo rectal, o 0,2 ml de heces, o hisopo para alimentos, o hisopo de lesiones o hisopo de superficie ambiental .

Comuníquese con DIAGNOGEN si necesita asesoramiento para determinar un tipo de muestra apropiado para una aplicación de diagnóstico específica. Para los tipos de muestras que no se enumeran aquí, comuníquese con DIAGNOGEN para confirmar la aceptabilidad de la muestra y las instrucciones de envío.

Para todos los tipos de muestras, si habrá un retraso en el envío o durante un clima muy cálido, refrigere las muestras hasta que se envíen y envíelas con una compresa fría, a menos que se especifiquen requisitos de envío más estrictos. Las muestras congeladas deben enviarse de modo que permanezcan congeladas durante el transporte. Consulte las instrucciones de envío para obtener más información.

Tiempo de respuesta: 2 días hábiles

Metodología: PCR cualitativa

Rango normal: no detectado